血透液热原检测方法

dearhang

关于血透液的热原检测,目前大多采用鲎试剂法.但有不少检测的实验设计不够科学,有的仅单纯做检品管理,甚至连阳性管和阴性管都没有,更不用说检品阳性管.这样的检测结果是不科学、不可靠的。该实验应该还应该包括检品阳性管，它的作用的为了排除样品液对凝聚反应的影响,阴性管是为了验证操作及用具是否符合标准,阳性管是为了验证试剂的有效性.现将试验表格上传,供大家参考!:ok :ok

[ 本帖最后由 fjzzzyyygk 于 2009-1-7 11:34 编辑 ]








细菌内毒素检测报告单1.doc



2009-1-7 11:32 上传
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safihu
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lisa天使

我们医院好像无法做内毒素监测，我也想知道如何做，如果涉及的试剂和其他设备不是很贵，争取检验科也能开展。

safihu

原帖由 fjzzzyyygk 于 2009-1-7 11:27 发表
                               
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关于血透液的热原检测,目前大多采用鲎试剂法.但有不少检测的实验设计不够科学,有的仅单纯做检品管理,甚至连阳性管和阴性管都没有,更不用说检品阳性管.这样的检测结果是不科学、不可靠的。该实验应该还应该包括检 ...

有没有操作的规程，还是不太了解如果来做检测的。:(

lwk6088

[h1]血透[/h1]


请教透析液内毒素检测方法，谢谢了！！！

flyjet

鲎试剂不贵，找鲎试剂厂买，鲎试剂和内毒素都是几十块一盒，细菌内毒素检查用水几块钱一盒。（均为10支/盒），所需要的试剂和仪器如下：
材料和设备
1.1选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。
1.2准备若干支10ⅹ75mm玻璃反应试管（若使用0.1ml规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器（无热原吸头）或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（37±1℃）。

鲎试剂凝胶法说明书见：http://www.houshiji.com/newslist.asp?newsid=161
中国药典2005版细菌内毒素检查法：http://www.houshiji.com/newslist.asp?newsid=135

[ 本帖最后由 flyjet 于 2009-3-30 14:11 编辑 ]

忘忧草

感谢，我会留意这个问题。:handshake :handshake :handshake :handshake

沧海一粟

[h1]回复 #1 fjzzzyyygk 的帖子[/h1]


你这个就是化验单，没有具体的检测方法呀！:o

沧海一粟

[h1]回复 #5 flyjet 的帖子[/h1]


谢谢！我们医院是做鲎试验的，明天我拿这个标准去核对一下，他们做的对不对！:lol

依依

[h1]回复 #5 flyjet 的帖子[/h1]


我医院目前想做鲎试剂，除了相应试剂以外，还需要什么特殊设备吗？

flyjet

原帖由 依依 于 2009-4-7 14:23 发表
                               
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我医院目前想做鲎试剂，除了相应试剂以外，还需要什么特殊设备吗？

不用特殊仪器，基本上所有的医院或药厂实验室都有。看看凝胶法鲎试剂的说明书吧！
来源：http://www.houshiji.com/newslist.asp?newsid=161

凝胶法鲎试剂使用说明书
【名称】
通用名：鲎试剂
英文名：Tachypleus Amebocyte Lysate （简称TAL）
汉语拼音：hou shi ji
本品主要成份为B因子、C因子、凝固酶原、凝固蛋白原。
【用途】专用于细菌内毒素检查。
【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。
【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【用法】
1．材料和设备
1.1选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。
1.2准备若干支10ⅹ75mm玻璃反应试管（若使用0.1ml规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（37±1℃）。
2．实验操作
2.1 稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）1支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。
2.2 TAL试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于TAL试剂中，轻轻振摇至少30S至试剂完全溶解。注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。
2.3 检查操作
2.3.1 取分装有0.1ml 鲎试剂溶液的10×75mm试管或复溶后的0.1ml /支规格的鲎试剂原安瓿8支，其中2支作供试品管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。
2.3.2 每支供试品管加入0.1ml供试品；阴性对照管加入0.1ml检查用水；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ内毒素的供试品。
2.3.3 封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37±1℃的恒温器中孵育60±2分钟，然后取出观察结果。试管在孵育期间应避免任何的振动。
2.4 结果判断
2.4.1 将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°时，管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
2.4.2 阴性对照管均为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。
【注意事项】
1.本品仅用于体外细菌内毒素检测，禁止用于注射、口服等。
2. 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在250℃干烤至少60min，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
3.当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验，方法见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“鲎试剂灵敏度复核试验”。
4.有些物质可能引起假阳性或假阴性，所以第一次使用本品，供试品必须进行干扰实验，方法见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“干扰试验”。
5.若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查用水或实验器具受到污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确，或标准内毒素的稀释有误；供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。
【贮藏条件】避光，阴凉处保存。
【批准文号】[88]卫药准字SJ-02号
【规    格】0.1ml、0.5ml、1ml、2ml
【包    装】安瓿10支装、抗生素瓶10瓶装
【产品批号】见外盒
【生产日期】见外盒
【有效期至】见外盒
【生产企业】
公司名称：厦门鲎试剂实验厂有限公司
公司地址：厦门海沧新阳工业区新嘉路131号（361022）
销售电话：（0592）2085561、2095294
销售传真：（0592）2095294
网    址：www.houshiji.com